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更新時(shí)間:2020-09-08
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產(chǎn)品名稱(chēng) | ATCC15834 感受態(tài)細胞 |
規格 | 100ul*10/100ul*50/100ul*100 |
貨號 | YSRIBIO9751 |
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細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
布魯氏桿菌IgG抗體檢測試劑盒 英文名稱(chēng):Paeonilactone C 純度:≥97%
布魯氏桿菌IgM抗體檢測試劑盒 英文名稱(chēng):Paeonilactone B 純度:97%
布魯氏桿菌IgA抗體檢測試劑盒 英文名稱(chēng):Paeoniflorigenone 純度:≥98%
B細胞淋巴瘤因子3檢測試劑盒 英文名稱(chēng):p-Menthane-1,2,8-triol 純度:≥97%
肝配蛋白A1檢測試劑盒 英文名稱(chēng):Cuniloside B 純度:97%
半乳糖檢測試劑盒 英文名稱(chēng):Oleuropeic acid 純度:≥98%
蛋白(肽酰脯氨酰順;反異構酶)檢測試劑盒 英文名稱(chēng):Naginata ketone 純度:≥98%
17,20-裂解酶檢測試劑盒 英文名稱(chēng):Paeoniflorin 純度:≥98%
α-半乳糖甘酶A檢測試劑盒 英文名稱(chēng):Benzoylpaeoniflorin 純度:≥98%
脫乙?;鶛z測試劑盒 英文名稱(chēng):8-Debenzoylpaeoniflorin 純度:≥97%
腺苷酸激酶檢測試劑盒 英文名稱(chēng):Mudanpioside H 純度:95%
小凹蛋白檢測試劑盒 英文名稱(chēng):Mudanpioside J 純度:≥98%
小凹蛋白1檢測試劑盒 英文名稱(chēng):Mudanpioside C 純度:95%
硝基還原酶檢測試劑盒 英文名稱(chēng):Benzoyloxypaeoniflorin 純度:≥98%
利什曼原蟲(chóng)IgG抗體檢測試劑盒 英文名稱(chēng):2'-O-Benzoylpaeoniflorin 純度:≥98%
杜氏利什曼原蟲(chóng)IgM抗體檢測試劑盒 英文名稱(chēng):Galloylpaeoniflorin 純度:≥98%
ATCC15834 感受態(tài)細胞DSPP/Dentin phosphophoryn 牙本質(zhì)蛋白一抗 * 0.1ml Chromium solution
Cathepsin S 組織蛋白酶S一抗 * 0.2ml Chromium solution
IGF2BP2/IMP2 胰島素樣生長(cháng)因子ⅡmRNA結合蛋白2一抗 * 0.2ml Cobalt standard
ELL3 神經(jīng)生長(cháng)因子調控抑制蛋白一抗 * 0.2ml Cobalt standard
Laminin 2 alpha 層粘蛋白α2一抗 * 0.2ml Dysprosium standard
MLLT11 髓系/淋巴或混合型白血病11一抗 * 0.2ml Europium standard
KIAA1522 KIAA1522蛋白一抗 * 0.2ml Fluoride standard
nonmuscle Myosin IIA 非平滑肌肌球蛋白2A一抗 * 0.2ml Fluoride standard
操作方法:
1. 感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物) 并用手EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。如果進(jìn)行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少13 h。
基本共性:
1、所有的細胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質(zhì)及糖被構成的生物膜,即細胞膜。
2、所有的細胞都含有兩種核酸:即DNA與RNA。
3、作為遺傳信息復制與轉錄的載體。
4、作為蛋白質(zhì)合成的機器—核糖體,毫無(wú)例外地存在于一切細胞內,核糖體,是蛋白質(zhì)合成的機器,在細胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5、所有細胞的增殖都以一分為二的方式進(jìn)行分裂。
6、能進(jìn)行自我增殖和遺傳
7、新陳代謝
8、細胞都具有運動(dòng)性,包括細胞自身的運動(dòng)和細胞內部的物質(zhì)運動(dòng)
細胞培養的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對象是活細胞
在實(shí)驗過(guò)程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長(cháng)時(shí)間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗觀(guān)察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過(guò)細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類(lèi)型的細胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究?jì)热荼阌谟^(guān)察、檢測和記錄
產(chǎn)品僅用于科研采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。