2型神經(jīng)纖維瘤抗體的標記實(shí)驗要點(diǎn)

2型神經(jīng)纖維瘤抗體的標記實(shí)驗要點(diǎn)：

1.如在反應混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會(huì )抑制標記反應。因此,蛋白質(zhì)在反應前要對 0.1mol/L緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析；

2.所用的NHSB及待化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會(huì )有所不同,選擇不當則影響標記的效率,應先用幾個(gè)不同的分子比來(lái)篩選最適條件；

3.用NHSB量過(guò)量也是不利的,抗原的結合位點(diǎn)可能因此被封閉,導致抗體失活；

4.由于抗體的氨基不易接近可能造成化不足,此時(shí)可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等；

5.當游離ε-氨基(賴(lài)氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結合位點(diǎn)時(shí),或位于酶的催化位點(diǎn)時(shí),化會(huì )降低或損傷抗體蛋白的結合力或活性；

6.還可能與不同的功能基團,如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及基,也可與糖基共價(jià)結合；

7.交聯(lián)反應后,應充分透析,否則,殘余的會(huì )對化抗體與親和素的結合產(chǎn)生競爭作用；

8.在細胞的熒光標記實(shí)驗中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細胞可導致高本底。