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更新時(shí)間:2020-09-08
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產(chǎn)品名稱(chēng) | GV3101(pJlC SA-rep)電擊感受態(tài)細胞 |
規格 | 50ul*10/50ul*50 |
貨號 | YSRIBIO9715 |
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細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
Chicken Anti-Thrombin Ⅲ, AT-Ⅲ Elisa Kit 1,3,5-三(溴甲基)苯(>98.0%(GC))其他種屬ELISA試劑盒規格:96T
Chicken Heat Shock Protein 20, HSP-20 Elisa Kit 并四苯(>98.0%(HPLC))其他種屬ELISA試劑盒規格:48T
Chicken Heat Shock Protein 20, HSP-20 Elisa Kit 并四苯 (升華提純)其他種屬ELISA試劑盒規格:96T
Chicken Heat Shock Protein 60, HSP-60 Elisa Kit 并五苯(以升華法純化)其他種屬ELISA試劑盒規格:48T
Chicken Heat Shock Protein 60, HSP-60 Elisa Kit 顏料藍 15(以升華法純化)其他種屬ELISA試劑盒規格:96T
Hydroxycorticosteroids, 17-OHCS Elisa Kit 酞菁(以升華法純化)其他種屬ELISA試劑盒規格:48T
Hydroxycorticosteroids, 17-OHCS Elisa Kit 苉(升華提純)其他種屬ELISA試劑盒規格:96T
Chicken Interleukin 4, IL-4 Elisa Kit 5,6,11,12-四苯基并四苯(升華提純)其他種屬ELISA試劑盒規格:48T
Chicken Interleukin 4, IL-4 Elisa Kit 1,2,3,4,8,9,10,11,15,16,17,18,22,23,24,25-十六氟酞菁銅(II)(以升華法純化)其他種屬ELISA試劑盒規格:96T
Chicken Interleukin 2, IL-2 Elisa Kit3,4,9,10-苝四羧酸二酐(>98.0%(T))其他種屬ELISA試劑盒規格:48T
Chicken Interleukin 2, IL-2 Elisa Kit雙(亞甲基二硫代)四硫富瓦烯[有機電子材料]其他種屬ELISA試劑盒規格:96T
Chicken nitric oxide, NO Elisa Kit 雙(三亞甲基二硫代)四硫富瓦烯[有機電子材料]其他種屬ELISA試劑盒規格:48T
Chicken nitric oxide, NO Elisa Kit 四硫富瓦烯(>98.0%(GC))其他種屬ELISA試劑盒規格:96T
Chicken Herpes simplexvirus Ⅱ antibody, HSVⅡ-Ab Elisa Kit 四(甲硫代)四硫富瓦烯[有機電子材料]其他種屬ELISA試劑盒規格:48T
Chicken Herpes simplexvirus Ⅱ antibody, HSVⅡ-Ab Elisa Kit 四(十八烷基硫代)四硫富瓦烯[有機電子材料]其他種屬ELISA試劑盒規格:96T
Chicken Complement 3 split product, C3SP Elisa Kit 四(戊硫代)四硫富瓦烯[有機電子材料]其他種屬ELISA試劑盒規格:48T
GV3101(pJlC SA-rep)電擊感受態(tài)細胞DHRS7C 短鏈脫酶/還原酶家族7C一抗 * 0.2ml DLOrnithine, monohydrochloride
DHRS4L2 短鏈脫酶/還原酶家族4樣2蛋白一抗 * 0.2ml DLTartaric acid hydrate
GIMAP1 GTP酶IMAP家族成員1一抗 * 0.2ml DMalic acid
GIMAP2 GTP酶IMAP家族成員2一抗 * 0.2ml DMS
GIMAP3 GTP酶IMAP家族成員3一抗 * 0.2ml DNorleucine
GIMAP4 GTP酶IMAP家族成員4一抗 * 0.2ml Dopamine hydrochloride
GIMAP5 GTP酶IMAP家族成員5一抗 * 0.2ml DST
GIMAP6 GTP酶IMAP家族成員6一抗 * 0.2ml dUTP
操作方法:
1. 感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物) 并用手EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。如果進(jìn)行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少13 h。
基本共性:
1、所有的細胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質(zhì)及糖被構成的生物膜,即細胞膜。
2、所有的細胞都含有兩種核酸:即DNA與RNA。
3、作為遺傳信息復制與轉錄的載體。
4、作為蛋白質(zhì)合成的機器—核糖體,毫無(wú)例外地存在于一切細胞內,核糖體,是蛋白質(zhì)合成的機器,在細胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5、所有細胞的增殖都以一分為二的方式進(jìn)行分裂。
6、能進(jìn)行自我增殖和遺傳
7、新陳代謝
8、細胞都具有運動(dòng)性,包括細胞自身的運動(dòng)和細胞內部的物質(zhì)運動(dòng)
細胞培養的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對象是活細胞
在實(shí)驗過(guò)程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長(cháng)時(shí)間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗觀(guān)察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過(guò)細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類(lèi)型的細胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究?jì)热荼阌谟^(guān)察、檢測和記錄
產(chǎn)品僅用于科研采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。