Rosetta-gami（DE3）pLysS 感受態(tài)細胞

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更新時(shí)間：2020-09-08

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細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
Porcine acetylcholine receptor antibody, AChRab Elisa Kit大內皮素-1（1-38），人Porcine/豬Elisa試劑盒規格：96T

Porcine Heat Shock Protein 90, HSP-90 Elisa Kit大內皮素-1 （1-39），豬Porcine/豬Elisa試劑盒規格：48T

Porcine Heat Shock Protein 90, HSP-90 Elisa Kit腦鈉素-32，大鼠Porcine/豬Elisa試劑盒規格：96T

Porcine Heat Shock Protein 70, HSP-70 Elisa Kit鈴蟾肽Porcine/豬Elisa試劑盒規格：48T

Porcine Heat Shock Protein 70, HSP-70 Elisa Kit緩激肽Porcine/豬Elisa試劑盒規格：96T

Porcine Heat Shock Protein 40, HSP-40 Elisa Kit緩激肽（1-5）Porcine/豬Elisa試劑盒規格：48T

Porcine Heat Shock Protein 40, HSP-40 Elisa Kit緩激肽（1-6）Porcine/豬Elisa試劑盒規格：96T

Porcine Heat Shock Protein 20, HSP-20 Elisa Kit緩激肽（1-7）Porcine/豬Elisa試劑盒規格：48T

Porcine Heat Shock Protein 20, HSP-20 Elisa Kit頰肽Porcine/豬Elisa試劑盒規格：96T

Porcine C-reactive protein, CRP Elisa Kit磷酸酶，雞Porcine/豬Elisa試劑盒規格：48T

Porcine C-reactive protein, CRP Elisa Kit降鈣素，人Porcine/豬Elisa試劑盒規格：96T

Porcine Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1, sICAM-1 Elisa Kit降鈣素，大鼠Porcine/豬Elisa試劑盒規格：48T

Porcine Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1, sICAM-1 Elisa Kit降鈣素基因相關(guān)肽（8-37），人Porcine/豬Elisa試劑盒規格：96T

swine major histocompatibility complexⅡ, MHCⅡ/SLAⅡ Elisa Kit降鈣素基因相關(guān)肽Ⅱ，人Porcine/豬Elisa試劑盒規格：48T

swine major histocompatibility complexⅡ, MHCⅡ/SLAⅡ Elisa Kit降鈣素基因相關(guān)肽，大鼠Porcine/豬Elisa試劑盒規格：96T

Porcine soluble P-selectin, sP-Selectin Elisa Kit蛋白酶1底物2m，熒光Porcine/豬Elisa試劑盒規格：48T
Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞CCDC144NL  卷曲螺旋結構域蛋白144NL一抗    * 0.2ml 2,6Dichloroquinone4chlorimide

CCDC56  卷曲螺旋結構域蛋白56一抗    * 0.2ml 2Adamantanol

CCDC146  卷曲螺旋結構域蛋白146一抗    * 0.2ml 2Adamantanone

CCDC147  卷曲螺旋結構域蛋白147一抗    * 0.2ml 2Bromonaphthalene

ANGPTL1/Angiopoietin 1/ANG1  血管生成素1一抗    * 0.1ml 2Chloroacetamide

CCDC148  卷曲螺旋結構域蛋白148一抗    * 0.2ml 2Chloroethanesulfonic acid sodium salt

Angiopoietin 2/ANG2  血管生成素2一抗    * 0.1ml 2'Deoxyinosine5'monophosphate sodium salt

CCDC153  卷曲螺旋結構域蛋白153一抗    * 0.2ml 2Ethoxybenzaldehyde
操作方法：
1. 感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。如果進(jìn)行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少13 h。
基本共性:
1、所有的細胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質(zhì)及糖被構成的生物膜，即細胞膜。
2、所有的細胞都含有兩種核酸：即DNA與RNA。
3、作為遺傳信息復制與轉錄的載體。
4、作為蛋白質(zhì)合成的機器—核糖體，毫無(wú)例外地存在于一切細胞內，核糖體，是蛋白質(zhì)合成的機器，在細胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5、所有細胞的增殖都以一分為二的方式進(jìn)行分裂。
6、能進(jìn)行自我增殖和遺傳
7、新陳代謝
8、細胞都具有運動(dòng)性，包括細胞自身的運動(dòng)和細胞內部的物質(zhì)運動(dòng)
細胞培養的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對象是活細胞
在實(shí)驗過(guò)程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長(cháng)時(shí)間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗觀(guān)察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過(guò)細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類(lèi)型的細胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究?jì)热荼阌谟^(guān)察、檢測和記錄
產(chǎn)品僅用于科研采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。