stable 電擊感受態(tài)細胞

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廠(chǎng)商性質(zhì)：經(jīng)銷(xiāo)商

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更新時(shí)間：2020-09-08

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細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
Rabbit Angiopoietin 2, ANG-2 Elisa Kit硫酸沙丁胺醇（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：96T

Rabbit angiotension Ⅱ, ANG-Ⅱ Elisa Kit硫酸普拉睪酮鈉（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：48T

Rabbit angiotension Ⅱ, ANG-Ⅱ Elisa Kit撲米酮（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：96T

Rabbit soluble Factor-related Apoptosis, sFAS/Apo-1 Elisa Kit葡萄糖酸鋅（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：48T

Rabbit soluble Factor-related Apoptosis, sFAS/Apo-1 Elisa Kit曲安西龍（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：96T

Rabbit 6-keto-prostaglandin F1a, 6-K-PGF1a Elisa Kit舒林酸（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：48T

Rabbit 6-keto-prostaglandin F1a, 6-K-PGF1a Elisa KitHSP990Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：96T

Rabbit Thromboxane B2, TX-B2 Elisa Kit鹽酸妥拉唑林（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：48T

Rabbit Thromboxane B2, TX-B2 Elisa Kit鹽酸硫利達嗪（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：96T

Rabbit Vascuolar cell adhesion molecule 1, VCAM-1 Elisa Kit鹽酸卡替洛爾（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：48T

Rabbit Vascuolar cell adhesion molecule 1, VCAM-1 Elisa Kit二甲磺酸阿米三嗪（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：96T

Rabbit Fibrinogen, Fbg Elisa Kit蘿巴新（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：48T

Rabbit Fibrinogen, Fbg Elisa Kit卡莫氟(標準品)Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：96T

Rabbit D-Dimer, D2D Elisa Kit尼可占替諾（煙酸占替諾）標準品Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：48T

Rabbit D-Dimer, D2D Elisa Kit表戈米辛O（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：96T

Rabbit soluble interleukin-1 receptor Ⅰ, IL-1sR Ⅰ Elisa Kit琥珀酸鈉（標準品）Rabbit/兔Elisa試劑盒規格：48T
stable 電擊感受態(tài)細胞MEGF5/Slit3  復合型表皮生長(cháng)因子樣結構域蛋白5一抗    * 0.2ml Hematin

TRIM29/ATDC  共濟失調毛細血管擴張癥D相關(guān)蛋白一抗    * 0.2ml PEG 800

UBE2V1/UEV1A  泛素結合酶E2變異體1一抗    * 0.2ml Quinestrol

VHLH/Von Hippel Lindau  腦視網(wǎng)膜血管瘤G7蛋白一抗（逢希伯林道氏?。?   * 0.2ml Phosphodiesterase I from Crotalus adamanteus Venom

Cyclin B3  周期素B3一抗    * 0.2ml Propidium iodide

CCNDBP1/GCIP  周期素D結合蛋白1一抗    * 0.2ml Sodium dodecylbenzenesulfonate

AFF4  淋巴細胞相關(guān)AF4樣蛋白一抗    * 0.2ml Sodium silicate hydrate

Cyclin K/CCNK  周期素K一抗    * 0.2ml BluoGal
操作方法：
1. 感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì )降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養箱過(guò)夜培養。如果進(jìn)行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少13 h。
基本共性:
1、所有的細胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質(zhì)及糖被構成的生物膜，即細胞膜。
2、所有的細胞都含有兩種核酸：即DNA與RNA。
3、作為遺傳信息復制與轉錄的載體。
4、作為蛋白質(zhì)合成的機器—核糖體，毫無(wú)例外地存在于一切細胞內，核糖體，是蛋白質(zhì)合成的機器，在細胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5、所有細胞的增殖都以一分為二的方式進(jìn)行分裂。
6、能進(jìn)行自我增殖和遺傳
7、新陳代謝
8、細胞都具有運動(dòng)性，包括細胞自身的運動(dòng)和細胞內部的物質(zhì)運動(dòng)
細胞培養的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對象是活細胞
在實(shí)驗過(guò)程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長(cháng)時(shí)間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗觀(guān)察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過(guò)細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類(lèi)型的細胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究?jì)热荼阌谟^(guān)察、檢測和記錄
產(chǎn)品僅用于科研采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。