小腸結腸炎耶爾森菌PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品型號：50T

廠(chǎng)商性質(zhì)：經(jīng)銷(xiāo)商

訪(fǎng)問(wèn)量：948

更新時(shí)間：2020-07-21

實(shí)驗過(guò)程：
一、小腸結腸炎耶爾森菌PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。

原理是由一對引物介導，能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴增，經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽(yáng)性對照：有典型S型擴增曲線(xiàn)或Ct值≤35。
（2）陰性對照：Ct值＞38或無(wú)Ct值，線(xiàn)形為直線(xiàn)或輕微斜線(xiàn)，無(wú)指數增長(cháng)期。
2.標本結果判定：
（1）陽(yáng)性：標本檢測結果Ct值≤35或有明顯指數增長(cháng)期。
（2）可疑：標本檢測結果Ct值在35～38范圍內。此時(shí)應對標本進(jìn)行重復檢測，如重復實(shí)驗結果Ct值仍在35～38范圍內，有明顯指數增長(cháng)期，則判定為陽(yáng)性，否則為陰性。
（3）陰性：標本檢測結果Ct值＞38或無(wú)Ct值。

PCR實(shí)驗步驟:
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應組成一個(gè)循環(huán)，通過(guò)多次循環(huán)反應，使目的DNA得以迅速擴增。
其主要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側的兩條單鏈互補結合，兩個(gè)引物在模板上結合的位置決定了擴增片段的長(cháng)短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。
下列是公司正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：

Sea anenome (Discosoma) RFP peptide原裝、分裝3-苯氧芐醇(98%)

Sea anenome RFP peptide原裝、分裝果膠(半乳糖(干基計)≥74.0 %)

Dengue Virus E glycoprotein antibody [DE1]原裝、分裝果膠(半乳糖(干基計)≥74.0 %)

Prostate Specific Antigen peptide原裝、分裝燒石棉(CP,20-30目)

CDC42 antibody [M152]原裝、分裝硅鉬粉(99.8%)

PAK6 antibody原裝、分裝硅鉬粉(99.8%)

PAK6 (phospho S165) antibody原裝、分裝燒石棉(CP，10-20目)

Phospholipase C gamma 1/PLC-gamma-1 antibody [M156]原裝、分裝三酯(AR,99%)

Phospholipase C gamma 1/PLC-gamma-1 (phospho Y775) antibody原裝、分裝三酯(AR,99%)ARID5A antibody原裝、分裝毒晰外泌肽4（1-8）

Cortactin antibody [EP1922Y]原裝、分裝毒晰外泌肽4（3-39）

Cortactin antibody [EP1922Y]原裝、分裝毒晰外泌肽4（3-39）

Cortactin antibody [EP1922Y]原裝、分裝毒晰外泌肽（9-39）

ND6 antibody原裝、分裝實(shí)驗性過(guò)敏性致腦炎肽

BRN3A antibody [EP1972Y]原裝、分裝實(shí)驗性自身免疫性腦脊髓炎補償肽

BRN3A antibody [EP1972Y]原裝、分裝Eα (52–68)

BRN3A antibody [EP1972Y]原裝、分裝F-L-E-E-V

MT-CYB antibody原裝、分裝F-M-R-F
小腸結腸炎耶爾森菌PCR檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)解整合素樣金屬蛋白酶10檢測試盒20mg

解整合素樣金屬蛋白酶12檢測試盒20mg

解整合素樣金屬蛋白酶15檢測試盒20mg

解整合素樣金屬蛋白酶19檢測試盒20mg

解整合素樣金屬蛋白酶33檢測試盒20mg

解整合素樣金屬蛋白酶8檢測試盒20mg

解整合素樣金屬蛋白酶9檢測試盒20mg

金屬蛋白檢測試盒10mg

金屬蛋白2檢測試盒20mg