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更新時(shí)間:2023-08-03
常用的冷凍保存法:
① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多,有些可添加保護劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內,再放入低溫冰箱內進(jìn)行保存的。
② 干冰保存法(-70℃左右):即將菌種管插入干冰內,再置于冰箱內進(jìn)行冷凍保存。
③ 液氮保存法(-196℃):是適用范圍*的微生物保存法。
注意事項:
1、菌種常規培養時(shí)間:細菌1-2天,酵母3天,霉菌5-7天,大型真菌7-10天。
2、試管斜面種請盡快轉接,不建議長(cháng)期存放。
3、初次使用時(shí)請按照本說(shuō)明書(shū)推薦條件進(jìn)行復活培養,如使用其它類(lèi)型培養基或培養條件造成菌種不活等損失,BNCC不負責任。
4、使用者應保證菌種的安全儲存和操作,帶菌廢棄物應高壓滅菌處理后丟棄。
菌種的培養:
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(cháng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱(chēng)種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過(guò)擴大培養成為具有一定數量和質(zhì)量的純菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,用無(wú)菌手續挑取少許,接入瓊脂斜面培養基上,在25℃(或較高溫度)下培養5~7天(或較長(cháng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養基以獲得更多孢子(對于霉菌類(lèi)孢子制備,多數采用大米、小米之類(lèi)的天然培養基)。
5、將培養成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養基上,于25~28℃培養14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在上延續使用半年左右。
6、如果有些菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(cháng)、繁殖成大量菌體。其中的培養基組分應是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無(wú)機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
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