人5核苷酸酶ELISA檢測試劑盒間接法

人5核苷酸酶ELISA檢測試劑盒間接法：
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜。
 
2.次日洗滌3次。
 
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對照)于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,后一遍用DDW洗滌。
 
4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
 
5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
 
6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀(guān)察結果：反應孔內顏色越深，陽(yáng)性程度越強，陰性反應為無(wú)色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔O·D值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。