SURE 電擊感受態(tài)細(xì)胞

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更新時(shí)間：2020-09-08

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細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
Tri-iodothyronine, T3 Elisa Kit 四氫小檗堿（標(biāo)準(zhǔn)品）Rat/大鼠Elisa試劑盒規(guī)格：96T

thyroxine, T4 Elisa Kit通關(guān)藤苷I（標(biāo)準(zhǔn)品）Rat/大鼠Elisa試劑盒規(guī)格：48T

thyroxine, T4 Elisa Kit通關(guān)藤苷G（標(biāo)準(zhǔn)品）Rat/大鼠Elisa試劑盒規(guī)格：96T

Free Thyroxine, FT4 Elisa Kit白花前胡丙素（標(biāo)準(zhǔn)品）Rat/大鼠Elisa試劑盒規(guī)格：48T

Free Thyroxine, FT4 Elisa Kit紫檀芪（標(biāo)準(zhǔn)品）Rat/大鼠Elisa試劑盒規(guī)格：96T

Free Tri-iodothyronine Indes, Free-T3 Elisa Kit紫檀芪,紫檀Rat/大鼠Elisa試劑盒規(guī)格：48T

Free Tri-iodothyronine Indes, Free-T3 Elisa Kit魚藤酮Rat/大鼠Elisa試劑盒規(guī)格：96T

Neonatal Thyroxine, NN-T4 Elisa Kit7-表紫杉醇（標(biāo)準(zhǔn)品）Rat/大鼠Elisa試劑盒規(guī)格：48T

Neonatal Thyroxine, NN-T4 Elisa Kit澳洲茄胺;澳州茄胺（標(biāo)準(zhǔn)品）Rat/大鼠Elisa試劑盒規(guī)格：96T

Insulin, INS Elisa Kit細(xì)辛脂素（標(biāo)準(zhǔn)品）Rat/大鼠Elisa試劑盒規(guī)格：48T

Insulin, INS Elisa Kit大黃酚-8-O-葡萄糖苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Rat/大鼠Elisa試劑盒規(guī)格：96T

C-Peptide Elisa Kit金合歡素;刺槐素（標(biāo)準(zhǔn)品）Rat/大鼠Elisa試劑盒規(guī)格：48T

C-Peptide Elisa Kit氯化木蘭花堿（標(biāo)準(zhǔn)品）Rat/大鼠Elisa試劑盒規(guī)格：96T

Chorionic Gonadotrophin, CG Elisa Kit蒲公英甾醇乙酸酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Rat/大鼠Elisa試劑盒規(guī)格：48T

Chorionic Gonadotrophin, CG Elisa Kit反式茴香腦（標(biāo)準(zhǔn)品）Rat/大鼠Elisa試劑盒規(guī)格：96T

luteotropic hormone, LH Elisa Kit喬松素（標(biāo)準(zhǔn)品）Rat/大鼠Elisa試劑盒規(guī)格：48T
SURE 電擊感受態(tài)細(xì)胞phosphoPRKAB1(Ser182)  化腺苷單活化蛋白激酶β1一抗    * 0.1ml Span* 80

AMPK gamma 1  腺苷活化蛋白激酶γ1一抗    * 0.2ml PEG 1000

KLHDC5  kelch樣蛋白5一抗    * 0.2ml Tryptone

phosphoCMyc(Thr358)  化致癌基因CMyc一抗    * 0.1ml DNSCl, Dansyl chloride

phosphoCMyc(Thr373)  化致癌基因CMyc一抗    * 0.1ml NEthylmaleimide

KLHL22  Kelch樣蛋白22一抗    * 0.2ml Potassium bicarbonate

KNTC1/Kinetochore  著絲點(diǎn)關(guān)聯(lián)蛋白1一抗    * 0.2ml Sodium dodecanesulfonate

AMPK gamma 3/PRKAG3  腺苷活化蛋白激酶γ3一抗    * 0.2ml Theophylline
操作方法：
1. 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少13 h。
基本共性:
1、所有的細(xì)胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質(zhì)及糖被構(gòu)成的生物膜，即細(xì)胞膜。
2、所有的細(xì)胞都含有兩種核酸：即DNA與RNA。
3、作為遺傳信息復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的載體。
4、作為蛋白質(zhì)合成的機(jī)器—核糖體，毫無(wú)例外地存在于一切細(xì)胞內(nèi)，核糖體，是蛋白質(zhì)合成的機(jī)器，在細(xì)胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5、所有細(xì)胞的增殖都以一分為二的方式進(jìn)行分裂。
6、能進(jìn)行自我增殖和遺傳
7、新陳代謝
8、細(xì)胞都具有運(yùn)動(dòng)性，包括細(xì)胞自身的運(yùn)動(dòng)和細(xì)胞內(nèi)部的物質(zhì)運(yùn)動(dòng)
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
產(chǎn)品僅用于科研采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。