PCR熒光定量檢測試劑盒使用方法

PCR熒光定量檢測試劑盒使用方法:

一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對照，只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽(yáng)性對照。

2. 標記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對照。放冰上待用。

注意事項：

1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織，若為長(cháng)期冷凍組織，應盡量避免反復凍融，否則會(huì )導致模板的降解，影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存，易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間，也可在37℃水浴中預熱10 min，以溶解沉淀，混勻后再使用。

3. 電泳檢測時(shí)，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則，電泳時(shí)會(huì )在泳道中出現一大團拖尾亮帶，影響實(shí)驗結果。

4. 建議擴增片段長(cháng)度1 kb以?xún)?，以便擴增效率佳。

5. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并佩戴一次性手套操作。