關(guān)于17羥孕酮elisa試劑盒，你了解多少呢？

　　17羥孕酮elisa試劑盒是用于定量測量樣本中17羥孕酮（17-OHP）含量的實(shí)驗工具。采用了競爭性抑制酶免疫分析技術(shù)或雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附法。在檢測過(guò)程中，特異性抗體與樣本中的17-OHP發(fā)生競爭性結合反應，通過(guò)酶標儀測量反應后的顏色深淺來(lái)間接反映樣本中17-OHP的濃度。

　　下面將詳細探討17羥孕酮elisa試劑盒其作用、原理及操作方法：

　　1、檢測原理

　　雙抗體夾心法：該試劑盒采用雙抗體夾心法進(jìn)行檢測。首先將特異性的17羥孕酮抗體包被在微孔板上，然后依次加入待測標本和標準品。如果樣本中含有17羥孕酮，它將與包被抗體結合。

　　HRP標記的檢測抗體：接著(zhù)加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體，這種抗體也會(huì )與17羥孕酮結合，形成“抗體-抗原-抗體-HRP”復合物。

　　底物顯色：經(jīng)過(guò)溫育和徹d洗滌后，加入TMB底物。在HRP的催化下，TMB轉化為藍色，最終在酸性條件下變?yōu)辄S色。顏色的深淺與樣品中的17羥孕酮含量呈正相關(guān)。

　　2、樣品處理

　　血清和血漿：使用無(wú)熱原和內毒素的試管收集血液，并通過(guò)離心分離出血清或使用抗凝劑獲得血漿。細胞上清液和組織勻漿也需通過(guò)離心去除顆粒和聚合物。

　　保存條件：如果不立即進(jìn)行檢測，應將樣本分裝并凍存于-20℃，避免反復凍融，并在室溫下解凍以確保樣品均勻。

　　3、操作步驟

　　試劑準備：將試劑盒和所有試劑在室溫下平衡20分鐘。準備洗滌緩沖液、底物A和B等。

　　加樣和溫育：在設置好標準品孔和樣本孔后，加入相應的標準品和樣本，然后加入HRP標記的檢測抗體，封板后在37℃下溫育60分鐘。

　　洗板和顯色：溫育后棄去液體，洗板五次，然后加入底物A和B，再次在37℃下避光孵育15分鐘。

　　終止反應和讀數：加入終止液后，在450nm波長(cháng)下測定各孔的吸光度（OD值），根據標準曲線(xiàn)計算樣本濃度。

　　4、結果判斷

　　繪制標準曲線(xiàn)：利用Excel或其他軟件，以標準品濃度為橫坐標，對應OD值為縱坐標，繪制標準品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn)。根據曲線(xiàn)方程計算各樣本的濃度值。