西尼羅病毒PCR檢測試劑盒反應液的配制

西尼羅病毒PCR檢測試劑盒反應液的配制：

PCR反應體系的配置方式有時(shí)也會(huì )影響反應的正常進(jìn)行。常規方法與其它酶學(xué)反應一樣，在后加入DNA聚合酶。早期的PCR儀沒(méi)有帶加熱的蓋子，要求在反應液上覆蓋一層礦物油，防止水分蒸發(fā)。

對于使用具3’-5’外切活性的高溫DNA聚合酶時(shí)，有時(shí)會(huì )擴增不出產(chǎn)物。在遇到這個(gè)問(wèn)題時(shí)，如果將反應成分分開(kāi)配制，A管含模板、引物和dNTP，以及調整體積的H2O，B管含緩沖液、DNA聚合酶和水，然后再將兩管溶液混合起來(lái)，可較好地克服這個(gè)問(wèn)題。

 據我司規定未開(kāi)封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將標準品、檢測溶液A、檢測溶液B以及96孔板保存于-20℃。

按照常規的方法配制反應體系，有時(shí)會(huì )出現非特異性擴增的問(wèn)題。熱啟動(dòng)（hotstart）PCR操作方式可較好解決這一問(wèn)題。將dNTP、緩沖液，Mg2+和primer先配制好，然后加入一粒蠟珠（如AmpliWaxPCRQam100），加熱熔化，再冷卻，使蠟將溶液封住，后加入模板和DNA聚合酶等剩余成分。只有當PCR反應進(jìn)入高溫階段后，蠟層熔化，所有反應成分才會(huì )混合在一起。